The inhibition of the β-glucuronidase released from gut bacteria is associated with specific health-related benefits. Though a number of β-glucuronidase inhibition assays are currently in use, none of them can directly measure the relevant activity of each single constituent in a complex mixture, without prior separation and tedious isolation of the pure compounds. Thus, the hyphenation of the high performance thin layer chromatography (HPTLC) technique with a β-glucuronidase inhibition assay was investigated and successfully demonstrated for the first time. A colorimetric as well as fluorometric detection of the inhibitors was achieved using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucuronide as a substrate. Hence, β-glucuronidase inhibitors were detected as bright zones against an indigo blue or fluorescent background. The established method was optimized and validated employing the well-known inhibitor d-saccharic acid 1,4-lactone monohydrate. As proof of concept, the suitability of the new workflow was verified through analysis of two botanical extracts, Primula boveana and silymarin flavonolignans from Silybum marianum fruits. The found inhibitors were identified by spectroscopic methods; one of them, 3ʹ-O-(β-galactopyranosyl)-flavone, is here described as a newly isolated natural compound. The new hyphenation HPTLC-UV/Vis/FLD-β-glucuronidase inhibition assay-HRMS covers four orthogonal dimensions, i.e. separation, spectral detection, biochemical activity and structural characterization, in a highly targeted time- and material-saving workflow for analysis of complex or costly mixtures.

中文翻译：

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用于简化检测和量化应用于植物提取物的 β-葡萄糖醛酸酶抑制剂的新型平面检测

抑制肠道细菌释放的 β-葡萄糖醛酸酶与特定的健康相关益处有关。尽管目前使用了许多 β-葡萄糖醛酸酶抑制测定法，但它们都不能直接测量复杂混合物中每种单一成分的相关活性，而无需事先分离和繁琐地分离纯化合物。因此，首次研究并成功证明了高效薄层色谱 (HPTLC) 技术与 β-葡萄糖醛酸酶抑制测定的联用。使用 5-bromo-4-chloro-3-indoyl-β-D-glucuronide 作为底物实现了抑制剂的比色和荧光检测。因此，β-葡萄糖醛酸酶抑制剂在靛蓝或荧光背景下被检测为亮区。采用众所周知的抑制剂 d-糖精酸 1,4-内酯一水合物对已建立的方法进行了优化和验证。作为概念证明，通过对水飞蓟果实中的两种植物提取物 Primula boveana 和水飞蓟素黄酮木脂素的分析，验证了新工作流程的适用性。发现的抑制剂通过光谱方法鉴定；其中之一，3ʹ-O-(β-吡喃半乳糖基)-黄酮，在此被描述为一种新分离的天然化合物。新的连字 HPTLC-UV/Vis/FLD-β-葡萄糖醛酸酶抑制测定-HRMS 涵盖四个正交维度，即分离、光谱检测、生化活性和结构表征，在高度针对性的时间和材料节省工作流程中分析复杂或昂贵的混合物。4-内酯一水合物。作为概念证明，通过对水飞蓟果实中的两种植物提取物 Primula boveana 和水飞蓟素黄酮木脂素的分析，验证了新工作流程的适用性。发现的抑制剂通过光谱方法鉴定；其中之一，3ʹ-O-(β-吡喃半乳糖基)-黄酮，在此被描述为一种新分离的天然化合物。新的连字 HPTLC-UV/Vis/FLD-β-葡萄糖醛酸酶抑制测定-HRMS 涵盖四个正交维度，即分离、光谱检测、生化活性和结构表征，在高度针对性的时间和材料节省工作流程中分析复杂或昂贵的混合物。4-内酯一水合物。作为概念证明，通过对水飞蓟果实中的两种植物提取物 Primula boveana 和水飞蓟素黄酮木脂素的分析，验证了新工作流程的适用性。发现的抑制剂通过光谱方法鉴定；其中之一，3ʹ-O-(β-吡喃半乳糖基)-黄酮，在此被描述为一种新分离的天然化合物。新的连字 HPTLC-UV/Vis/FLD-β-葡萄糖醛酸酶抑制测定-HRMS 涵盖四个正交维度，即分离、光谱检测、生化活性和结构表征，在高度针对性的时间和材料节省工作流程中分析复杂或昂贵的混合物。来自水飞蓟果实的报春花和水飞蓟素黄酮木脂素。发现的抑制剂通过光谱方法鉴定；其中之一，3ʹ-O-(β-吡喃半乳糖基)-黄酮，在此被描述为一种新分离的天然化合物。新的连字 HPTLC-UV/Vis/FLD-β-葡萄糖醛酸酶抑制测定-HRMS 涵盖四个正交维度，即分离、光谱检测、生化活性和结构表征，在高度针对性的时间和材料节省工作流程中分析复杂或昂贵的混合物。来自水飞蓟果实的报春花和水飞蓟素黄酮木脂素。发现的抑制剂通过光谱方法鉴定；其中之一，3ʹ-O-(β-吡喃半乳糖基)-黄酮，在此被描述为一种新分离的天然化合物。新的连字 HPTLC-UV/Vis/FLD-β-葡萄糖醛酸酶抑制测定-HRMS 涵盖四个正交维度，即分离、光谱检测、生化活性和结构表征，在高度针对性的时间和材料节省工作流程中分析复杂或昂贵的混合物。