Charge heterogeneity analysis of monoclonal antibodies (mAbs) and complex formats, such as bispecifics, is crucial for therapeutic applications. In this study, we developed two capillary electrophoresis (CE)-based methods, capillary zone electrophoresis (CZE) and imaged capillary isoelectric focusing (iCIEF), for analyzing a broad spectrum of mAbs and complex mAb formats. For CZE, we introduced a new buffer system and optimized the background electrolyte (BGE) with an alternative dynamic coating agent and a superior polymeric additive. The pH of the BGE was increased, leading to enhanced resolution of high pI and complex format mAbs. In iCIEF, we identified an ampholyte combination offering a highly linear pH gradient and covering a suitable pH range. We also investigated alternatives to denaturing stabilizers and found that non-detergent sulfobetaine 195 exhibited excellent properties for iCIEF applications. These optimized methods provide a framework for the charge heterogeneity analysis of therapeutic mAbs and complex formats.

中文翻译：

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用于 mAb 和复杂形式生物治疗药物电荷变体分析的 CE 方法

单克隆抗体 (mAb) 和双特异性抗体等复杂形式的电荷异质性分析对于治疗应用至关重要。在本研究中，我们开发了两种基于毛细管电泳 (CE) 的方法，即毛细管区带电泳 (CZE) 和成像毛细管等电聚焦 (iCIEF)，用于分析广谱 mAb 和复杂的 mAb 形式。对于 CZE，我们引入了一种新的缓冲系统，并使用替代动态涂层剂和优质聚合物添加剂优化了背景电解质 (BGE)。BGE 的 pH 值增加，从而提高了高pI和复杂形式 mAb 的分辨率。在 iCIEF 中，我们确定了一种两性电解质组合，可提供高度线性的 pH 梯度并覆盖合适的 pH 范围。我们还研究了变性稳定剂的替代品，发现非去污剂磺基甜菜碱 195 在 iCIEF 应用中表现出优异的性能。这些优化的方法为治疗性单克隆抗体和复杂形式的电荷异质性分析提供了框架。